芝麻黃曲霉毒素總量檢測的解決方案

普瑞邦芝麻黃曲霉毒素總量檢測的解決方案

【進口芝麻檢出黃曲霉毒素超標】新年初，黃島檢驗檢疫局發(fā)布近期進出口檢驗檢疫情況，進口芝麻中檢出了黃曲霉毒素超標等情況受到關(guān)注。芝麻是我國主要油料作物之一，且芝麻營養(yǎng)豐富，成為多種食品的主要材料。中國即成為芝麻生產(chǎn)與消費大國。目前我國年食用和加工芝麻約需要110萬噸，但芝麻年生產(chǎn)量只有65萬-70萬噸，產(chǎn)不足需導(dǎo)致2013年前9個月我國芝麻進口量大增。海關(guān)、出入境檢驗檢疫等部門對芝麻檢測量逐漸增大。

然而，芝麻也是容易感染黃曲霉的農(nóng)作物之一，黃曲霉毒素對芝麻產(chǎn)品具有較高的親和性。黃曲霉毒素具有致癌性和毒性，黃曲霉菌的侵染和產(chǎn)生不僅發(fā)生在芝麻產(chǎn)品的種植、成熟、收獲期中，而且在收獲的晾曬、存儲及其以后的加工、儲運等加工過程中也會產(chǎn)生。我國芝麻種植面積大，地域廣泛，且目前我國農(nóng)村芝麻種植地區(qū)尚未實施備案管理或認證資質(zhì)，國家相關(guān)部門無法進行全部控制。此外，我國從國外進口的芝麻也有質(zhì)量問題，近期，檢驗檢疫局連續(xù)檢出進口芝麻不合格，黃曲霉毒素超標情況受到關(guān)注。

Pribolab(普瑞邦)作為專業(yè)從事霉菌毒素檢測技術(shù)與產(chǎn)品服務(wù)的主要供應(yīng)商之一，整合了原北京泰樂祺檢測應(yīng)用實驗室，專注于霉菌毒素檢測產(chǎn)品和技術(shù)解決方案的服務(wù),以期快速提出解決方案。針對芝麻中黃曲霉毒素總量的檢測，以穩(wěn)定、準確、快速、簡單為導(dǎo)向，建立了一套完整的解決方案。

參考標準：根據(jù)國標《GB/T18979-2003》食品中黃曲霉毒素的測定標準。

（一）免疫親和柱-高效液相色譜法：GB/T18979-2003國標方法

1. 所需設(shè)備和耗材　　

高效液相色譜儀

色譜柱：真菌毒素專用色譜柱（PRC-18，Pribolab）。

免疫親和柱：PriboFast®黃曲霉毒素總量免疫親和柱(3ml，25支/盒，IAC-011-3，Pribolab，快速過柱型)。

高速均質(zhì)器：達到22000rpm 以上(EQ-WR-1L，Pribolab)。

玻璃纖維濾紙：PriboFast®玻璃纖維濾紙（GMF-110，Pribolab）

PriboFast®八位泵流操作架（Pribolab，用于控制免疫親和柱過柱流速）

標準品：黃曲霉毒素混標（2µg/ml 黃曲霉毒素 B1, G1 和0.5µg/ml黃曲霉毒素B2, G2 (4/1/4/1)，STD#1081，Pribolab）

2. 樣品前處理:普瑞邦針對糧谷、油脂、油料等提供不同的處理方案(詳細方案請聯(lián)系普瑞邦，普瑞邦開發(fā)了針對不同產(chǎn)品提供優(yōu)化的處理方案)

3. 免疫親和柱凈化:

富集:提取液以2-3mL/min流速通過免疫親和柱，直至2-3mL空氣通過柱體；

洗滌: 10mL 0.1%的吐溫/PBS清洗，以10mL水洗柱子2次，并使2-3mL空氣通過柱體。

洗脫：加入1.0mL色譜級甲醇洗脫,孵育30秒以上,以流速為1-2mL/min過柱，收集全部洗脫液供檢測用。

4. 高效液相色譜分析                        

（二）酶聯(lián)免疫法

1. 方法原理

采用直接競爭酶聯(lián)免疫法，在微孔板上預(yù)包被黃曲霉毒素抗原，加入樣本（或黃曲霉毒素標準品溶液）及辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素特異抗體。樣本或標準品溶液中的抗原與預(yù)包被在板孔上的抗原競爭結(jié)合酶標抗體。未結(jié)合的酶標抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色液，讀取吸光值。樣品吸光值與其所含黃曲霉毒素總量成負相關(guān)，與標準曲線比較即可得出樣品中黃曲霉毒素總量的含量。

2. 試劑和材料：酶聯(lián)免疫試劑盒（PriboFastR黃曲霉毒素總量試劑盒EKT-011，Pribolab）

3. 樣本前處理：芝麻及其制品：粉碎、溶解、離心取上清液待測。

4. 檢測步驟

4.1 免疫反應(yīng)30min；洗板5次；顯色反應(yīng)30min；終止反應(yīng)，酶標儀讀OD值。

5. 分析結(jié)果的表述

用酶標儀判讀結(jié)果。

（三）免疫金標快速檢測法

1. 方法原理

黃曲霉毒素總量快速檢測條應(yīng)用了競爭抑制免疫層析的原理，樣本中的黃曲霉毒素總量在酶標孔中與膠體金標記的特異性抗黃曲霉毒素單克隆抗體結(jié)合，抑制了抗體和NC膜檢測線上AF－BSA偶聯(lián)物的結(jié)合。如果樣本中黃曲霉毒素總含量大于0.5 ug/L，檢測線不顯顏色，結(jié)果為陽性；反之，檢測線顯紅色，結(jié)果為陰性。

2. 試劑和材料

膠體金檢測試紙：PriboStripTM黃曲霉毒素總量免疫金標快速檢測條（PR-011，Pribolab）

3. 分析步驟：芝麻及其制品溶解后取上清液檢測。吸取樣品滴加到加樣孔中，8-15分鐘讀取結(jié)果。在C線顯色的情況下：T 線顯色比C線深或一樣深是陰性。T 線顯色比C線淺，或無顯色是陽性結(jié)果。